L'inibizione non competitiva, nota anche come inibizione anticoncorrenziale, si verifica quando un inibitore enzimatico si lega solo al complesso formato tra l'enzima e il substrato (il complesso ES). L'inibizione non competitiva si verifica tipicamente nelle reazioni con due o più substrati o prodotti. L'inibizione non competitiva si distingue dall'inibizione competitiva da due osservazioni: prima l'inibizione non competitiva non può essere invertita aumentando [S] e in secondo luogo, il grafico Lineweaver-Burk produce linee parallele anziché intersecanti.