Inhibicja niekonkurencyjna, znana również jako inhibicja antykonkurencyjna, ma miejsce, gdy inhibitor enzymu wiąże się tylko z kompleksem utworzonym między enzymem a substratem (kompleks ES). Niekonkurencyjne hamowanie zwykle występuje w reakcjach z dwoma lub większą liczbą substratów lub produktów. Inhibicja niekonkurencyjna różni się od inhibicji konkurencyjnej dwoma obserwacjami: po pierwsze inhibicji niekonkurencyjnej nie można odwrócić przez zwiększenie [S], a po drugie, wykres Lineweaver-Burk daje linie równoległe, a nie przecinające się.